细胞功能相关（凋亡、周期、增殖）

1、细胞凋亡实验

细胞凋亡又称程序性死亡，是机体主动的、高度有序地清楚无用细胞的过程

凋亡开始以后发生的第一个事件是细胞膜发生了外翻，位于膜内的磷脂酰丝氨酸（PS）翻转到了膜外侧，第二个事件是线粒体膜电位发生变化，细胞色素C释放，接下来Caspase通路被激活，最后的事件是DNA片段化，细胞形成凋亡小体，完成了整个凋亡过程

2、细胞周期实验

检测细胞周期最常用的方式就是检测细胞DNA含量，正常生长的细胞都会经历分裂过程，G0/G1期是两倍体时期，S期DNA开始合成，到G2/M期，细胞处于四倍体时期，之后细胞一分为二，进入下一个细胞周期。所用的试剂均为DNA染料或DNA探针。

实验步骤：

A、 收集并用PBS重悬细胞（每管约10^6cells），洗涤两次；

B、 使用1mL的PBS重悬细胞于离心管内，并保持离心管在涡旋振荡仪维持细胞一直处于混匀的状态，然后一滴一滴的加入无水乙醇；

C、 在4℃固定至少1小时，或者-20℃过夜；

D、 使用PBS洗涤两次，并加入500ul的PI/RNase染色试剂，混匀室温避光孵育15min；

E、 上机检测

对于一般的PI检测，可以用-20度预冷的75%乙醇固定，使用PI/Rnase染色液染色。实验流程中固定过程十分关键。不同的细胞对固定的过程敏感度不一致，所以需要做预实验尝试。

3、细胞增殖实验

细胞增殖实验可以用细胞增殖染料CFSE或VPD450来检测，CFSE与FITC同一通道检测，VPD450与BV421同一通道检测。CFSE和VPD450染色原理类似，染色之后，细胞质会与染料结合，分裂一代之后胞浆内染料浓度减半，再次分裂，胞浆内染料浓度降低为原来的四分之一。随着分裂代数的增加，染料浓度逐渐降低。

4、CBA液相多重蛋白检测实验

A、什么是高通量液相蛋白检测（CBA）技术？

CBA是利用一系列不同荧光强度得微球，同时分析样本中多种可溶性成份的流式检测方法。每个CBA微球都有特定的荧光强度，大小一致，包被有特异性抗体，提供了捕获表面，有效捕获待测蛋白，再加入荧光标记（PE）的检测抗体，形成“三明治”夹心复合物进行检测。（工作原理如下图）

B、CBA主要分为三大类。一、CBA Kit：二、CBA Flex Set：三、CBA功能微球（如若需求相应指标可与我们联系）

CBA Kit是一类完整试剂盒，里面包含实验所需的所有试剂，不需要单独购买其他试剂；（需要仪器满足具有APC和PE荧光通道）

CBA Flex Set是一类自由组合的试剂，可以单独选取您感兴趣的指标，但是需要另外购买实验及上机所需的配套Buffer；（需要仪器满足APC、APC-Cy7和PE通道）

CBA功能微球是一类，提供单独的微球，上面不包被相应的抗体，需要客户自己包被使用，并搭配相应的实验上机所需及配套Buffer；