原代分离细胞培养是指从供体内取出组织后，经机械及消化分离成单个细胞或单一型细胞群，使之在体外模拟机体的生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下生存、生长和繁殖，能代表所来源组织细胞类型和表达组织的特异性特征。

原代细胞培养方法有：组织块培养法、消化培养法和悬浮细胞培养法。

1. 组织块培养法

（1）取材，将组织剪成或切成1mm³大小的小块，并加入少许培养基使组织湿润。

（2）将小块均匀涂布于瓶壁，每小块间距0.2 cm~0.5cm，一般在25mL培养瓶（底面积为17.5cm²）可接种20~30小块为宜，小块放置后，轻轻翻转培养瓶，使瓶底朝上，然后于瓶内加入适量培养基盖好瓶塞，将瓶倾斜放置在37℃温箱内。

（3）培养2~4小时，待小块贴附后，将培养瓶缓慢翻转平放，静置培养，动作要轻，严禁摇动和来回振荡，以防由于冲动而使小块漂起而造成培养失败，若组织块不易贴壁可预先在瓶壁涂一薄层血清、胎汁或鼠尾胶原等。开始培养时培养基不宜多，以保持组织块湿润即可，培养24小时后再补液，培养初期移动和观察时要轻拿轻放，开始几天尽量不去搬动，以利贴壁和生长，培养3~5天时可换液，一方面补充营养，一方面去除代谢产物和漂浮小块所产生的毒性作用。

图1. 组织块培养法流程

2. 消化培养法

该方法是采用前述的消化分散法，将妨碍细胞生长的细胞间质（包括基质、纤维等）去除，使细胞分散形成细胞悬液，然后分瓶培养。

图2. 消化培养法流程

3. 悬浮细胞培养法

对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

图3. 细胞悬液制备流程