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原代细胞的培养与维持

发布时间:2019-12-23 点击数:

1、静置贴壁细胞(包括半贴壁细胞的培养)

凡经消化液处理实体组织来源的细胞要通过充分漂洗,以尽量除去消化液的毒性,细胞接种时浓度要稍大一些,至少为5×108细胞/L,培养基可用EagleMEM)或DMEM培养,小牛血清浓度为10%~80%。在起始的2天中尽量减少振荡,以防止刚贴壁的细胞发生脱落,漂浮。

贴壁细胞长成网状或基本单层时,由于营养缺乏,代谢产物增多,pH变酸,不适宜细胞生长,此时细胞还未长成单层,未达到饱和密度,仍需继续培养,因此,需采取换液方式来更新营养成分以满足细胞继续生长繁殖的需要。其换液方法比较简单,即弃去旧液,加入与原培养液相同的等量完全培养基。

2、悬浮细胞的培养

凡来自外周血、胸腹水、脾脏、淋巴结、骨髓的淋巴细胞、造血干细胞以及白血病细胞,在原代培养时要尽量去除红细胞。若要将淋巴细胞及白血病细胞进行长期培养,淋巴细胞中要加入生长因子,白血病细胞中要加入少量的原患者血清,以利细胞生长,待细胞开始增殖甚至结成小团块,培养基中pH变酸,说明细胞生长繁殖良好,一般每隔3天需半量换液一次(换液时尽量使细胞不丢失),待细胞增殖加快,浓度明显增加,pH发生明显变化时,此时可考虑传代。

悬浮细胞在未达到饱和密度时,但培养基中的营养成分并不能维持细胞的营养需求时,只能采用半量换液的方式。

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